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如何科學(xué)挑選適用的ELISA試劑盒?實驗人必看的避坑指南

更新時間:2025-04-18   點擊次數(shù):198次

一、明確檢測目標(biāo)?

1.檢測對象是什么?

明確待測物是細胞因子、激素、病毒抗體還是其他蛋白。不同試劑盒針對的抗原表位和抗體對可能不同。

關(guān)鍵點:查看試劑盒說明書中的“檢測范圍"和“交叉反應(yīng)",確認是否覆蓋你的目標(biāo)物種和異構(gòu)體(如人/小鼠/大鼠)。


2.需要定量還是定性?

定量試劑盒需提供標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線,適合精確測量濃度;定性試劑盒(如診斷用)通常只判斷陰陽性。


二、匹配樣本類型

不同樣本的處理方式可能影響檢測結(jié)果:

血清/血漿:需避免溶血、脂血(可能引起非特異性結(jié)合)。

細胞培養(yǎng)上清:注意培養(yǎng)基中是否含高濃度BSA或胎牛血清(可能干擾檢測)。

組織裂解液:需驗證裂解緩沖液成分是否與試劑盒兼容(如避免強去垢劑)。

提示:試劑盒說明書會標(biāo)注已驗證的樣本類型,若使用特殊樣本(如腦脊液、唾液),建議先做預(yù)實驗驗證。


三、選擇試劑盒類型

ELISA有四大常見類型,適用場景不同:

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優(yōu)先選擇夾心法(靈敏度高、特異性強),但小分子只能選競爭法。


四、評估試劑盒性能

1.靈敏度與檢測限

靈敏度(最-低檢測濃度)和檢測范圍需覆蓋你的樣本濃度。例如:檢測血清細胞因子時,若樣本濃度低,需選擇高靈敏度試劑盒(如靈敏度≤1 pg/mL)。

2.批間差與穩(wěn)定性

查看廠商是否提供不同批次的CV(變異系數(shù))數(shù)據(jù),批間差應(yīng)<15%。避免因批次差異導(dǎo)致實驗重復(fù)性差。

3.抗體對來源

單克隆抗體特異性高但可能識別單一表位;多克隆抗體靈敏度高但需驗證交叉反應(yīng)。建議選擇經(jīng)Western Blot或質(zhì)譜驗證的抗體。


五、驗證與優(yōu)化

陽性/陰性對照:試劑盒應(yīng)提供明確對照,用于判斷實驗有效性。

回收率實驗:在樣本中加入已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品,回收率應(yīng)在80%-120%。

重復(fù)性測試:同一樣本重復(fù)3次檢測,CV值應(yīng)<10%。

若背景信號過高,可嘗試:縮短顯色時間、優(yōu)化封閉液(如使用5%脫脂奶粉)、增加洗滌次數(shù)。

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